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动物组织PCR试剂盒图片
产品货号:
SY0049
中文名称:
动物组织PCR试剂盒
英文名称:
Animal Tissue Direct PCR Kit
产品规格:
50T|200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强、操作简易。


本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA,如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。


本试剂盒中提供的2×Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性,不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化扩增步骤的操作过程,降低污染机率。


本试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。




组分50T200T保存
Lysis Buffer10mL20mL×22~8℃
Proteases100μL400μL-20℃
2×Tissue Direct PCR Mix(With Dye)500μL1mL×2-20℃
5×PCR Enhancer200μL800μL-20℃



  • Lysis Buffer为动物组织裂解缓冲液,建议保存于2~8℃。
  • Proteases为动物组织裂解剂,使用时请勿长久开盖,建议保存于-20℃,避免反复冻融。
  • 2×Tissue Direct PCR Mix (With Dye),建议保存于-20℃,避免反复冻融。
  • 5×PCR Enhancer,建议保存于-20℃,避免反复冻融。



  • Lysis Buffer和Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解。
  • 2×Tissue Direct PCR Mix(With Dye)包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg2+等;已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂,PCR产物可以直接进行电泳。
  • 5×PCR Enhancer:高GC含量扩增(如大于65%)时,建议使用5×PCR Enhancer。



  • 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。
  • 本制品仅作科研用途!



  • 在离心管中加入200μL Lysis Buffer和2μL Proteases,轻轻涡旋混匀。
  • 取约10mg(长度2mm左右)动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。
  • 55℃孵育5~30min,然后95℃处理5min。
  • 12000rpm离心2min。
  • 将上清转移至新的离心管,-20℃保存或直接用于PCR扩增。
    注:
    • Lysis Buffer与Proteases混合后尽快使用,不宜长期保存;大量样本操作时,可以将Lysis Buffer与Proteases按100μL:1μL的比例混匀备用。
    • 组织应取少量并尽量剪碎,以便裂解反应更顺利进行。各组织推荐使用量:鼠尾:长度2~4mm;鼠趾:1~4个;鼠脏器、脑:直径2~4mm;斑马鱼、线虫、果蝇等昆虫组织:1~4个;细胞数量:105~108个。斑马鱼、线虫、果蝇等较小样本的组织,可适当减少Lysis Buffer至50~100μL。昆虫等外壳坚硬的样本,建议剪碎样本并增加Proteases至4μL。
    • 55℃孵育,一般5min即可满足多数PCR需求,如鼠尾、鼠耳等组织;若需要的DNA量较大或样品较难裂解,可将时间延长至30min或更久;裂解时间可在5~30min之间调整,组织块不需完全裂解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
  • PCR反应鉴定—PCR反应体系
    成分用量终浓度
    2×Tissue Direct PCR Mix(With Dye)10μL
    Forward Primer(10μM)0.5μL0.25μM
    Reverse Primer(10μM)0.5μL0.25μM
    裂解产物(DNA模板)2μL-
    无菌超纯水至20μL-

    注:各组分使用前应充分混匀。
    • 模板使用量:建议总体系的5~20%之间,避免超过总体系的20%。
    • 引物终浓度:反应性能较差时,推荐在0.1~0.5μM范围内调整引物浓度。
    • 反应体系:推荐使用20μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
    • 体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。
    • 对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
  • PCR反应鉴定-PCR反应条件
    步骤温度时间循环数
    预变性94℃5min1
    变性94℃10sec35
    退火*60℃20sec
    延伸72℃20sec
    终延伸72℃5min1

    *:退火温度请参考引物的理论Tm值,退火温度可设置低于引物理论值5℃,或通过梯度PCR确定最佳温度。



常见问题可能原因解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。PCR反应体系或反应条件不合适。使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
PCR试剂保存不当失去活性。2×PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。
引物设计问题。尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。使用新鲜的试剂。
加入组织裂解液过量。增大反应体系,或减少裂解液的用量。
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。裂解混合液可在4℃保存2~3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
模板加入量不适合。在反应体系5~20%范围内优化模板加入量。
PCR循环数不足。适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5~10个循环为佳。
非特异性扩增PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。提高PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
PCR引物错配。重新设计PCR引物。
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带操作工具或试剂污染。实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
样本间交叉污染。每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

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